Introducción

En años recientes los microorganismos multirresistentes a los antibióticos se han incrementado en el mundo (McEwen y Collignon, 2017). ¿Por qué es un grave problema? La respuesta es porque no existen nuevas clases de antibióticos en el mercado desde 1980 (43 años) y es más difícil el tratamiento de enfermedades infecciosas (Miethke et al., 2021). Incluso, algunas personas han muerto a causa de infecciones por bacterias patógenas que son resistentes a todos los antibióticos disponibles en los hospitales (Murray et al., 2022). En la producción animal ocurre lo mismo, particularmente en la crianza de pollos de engorda por su rápido ciclo productivo. El problema es tan crítico que se han definido a estas bacterias patógenas como bacterias multi-drogo resistentes (MDR), ya que tienen por lo menos resistencia a un antibiótico de tres o más categorías distintas (Magiorakos et al., 2012). Por ello existen iniciativas globales para realizar acciones de atención a este problema, como el enfoque de Una Salud integrado por la Organización Mundial para la Alimentación y la Agricultura, Organización Mundial de la Salud, Organización Mundial de la Salud Animal y el Programa de las Naciones Unidas para el Medio Ambiente (WOAH, 2019). En este trabajo se analizó la resistencia hacia antibióticos de bacterias patógenas de pollos de engorda criados en México.

Objetivos

Analizar la resistencia hacia antibióticos de bacterias patógenas de pollos de engorda criados en México.

Materiales y métodos

Antibióticos y concentración: En total se probaron 4 antibióticos, por separado, a una concentración de 1 mg/ml: Enrofloxacina (Adquin 15%, Alder animal healt), Oxitetraciclina (Admicin 20%, Alder animal healt), Sulfametoxazol-trimetoprima (Trineler, Alder animal healt), Estreptocimina (Sulfestrep, Pisa).

Fuente de las bacterias infecciosas de prueba: Las bacterias patógenas fueron donadas por el Laboratorio de Biología Molecular del Centro Universitario de Ciencias Exactas e Ingenierías (CUCEI) de la Universidad de Guadalajara: E. coli O157:H7, Staphyloccocus aureus, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica serotipos: Enteritidis, Agona, Montevideo, Bredeney y Give. Dichas cepas fueron aisladas de muestras de plumas, moco intestinal y heces fecales de aves de corral que fueron obtenidas de granjas de producción a pequeña escala en la zona de los altos en Jalisco y que fueron manipuladas en condiciones experimentales entre los años 2014-2015, en un proyecto cuyo objetivo buscaba aislar bacterias ácido lácticas y otros patógenos de interés en inocuidad alimentaria. El aislamiento y caracterización bioquímica se llevó a cabo en medios selectivos (Agar MacConkey con Sorbitol para E. coli O157:H7; Agar Baird Parker con yema de huevo y telurito de potasio para Staphyloccocus aureus; Agar Oxford para Listeria monocytogenes; Agar Cetrimida para Pseudomonas aeruginosa y Agar Xilosa Lisina Deoxicolato para Salmonella) siguiendo los procedimientos descritos en el BAM (edición 8th). Adicionalmente, para el caso de E. coli O157:H7 se utilizaron tiras reactivas para la detección de antígenos O157 y H7 y para Salmonella se realizaron reacciones de aglutinación para determinar la presencia de los antígenos somáticos O, H y Vi, para finalmente enviar las cepas para su serotipificación al Instituto de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos InDRE. Para todas las cepas aisladas, la identificación molecular se llevó a cabo amplificando y secuenciando el gen 16S tal como fue descrito por Macías-Rodríguez et al. 2008 para confirmar género y especie.

Evaluación de la multidrogo resistencia, por la técnica de sembrado masivo y difusión del antibiótico en agar (Figura 1): Las bacterias patógenas se cultivaron en medio líquido de soya tripticasa (BD, Cat. BA-257107.03, NY, USA) a 37 °C por 24 horas en agitación (110 rpm), se concentraron por centrifugación (4,900 × g, 5 minutos) a 1 × 10⁷ células por mililitro. De esta suspensión celular, se sembraron 100 μL (mediante la técnica de dispersión superficial con un hisopo de algodón estéril, para cubrir toda la superficie del medio de cultivo) en una placa de cultivo con agar Müeller-Hinton (BD, Cat. PA-254032.08, NY, USA). En el agar de la placa se hicieron pozos de 0.5 cm de diámetro (profundidad de 0.5 cm, hasta llegar al fondo de la placa) y en cada uno se añadieron 10 μL de antibiótico (conteniendo 10 µg). Las placas de cultivo se dejaron reposar 30 minutos para que el antibiótico se impregnara en el agar y luego se incubaron a 37 °C por 24 horas. Trascurrido el tiempo de incubación se midió el área de inhibición (halo de no crecimiento de la población bacteriana, alrededor del pozo con antibiótico) en milímetros con un vernier (Fig. 1). Cada prueba se realizó por triplicado (Reyes et al. 2021).

Figura 1. Flujo de trabajo para determinar la sensibilidad de bacterias patógenas de pollo de engorda a diferentes antibióticos.

Resultados y Discusión

De las nueve bacterias patógenas, sólo tres fueron sensibles a la Oxitetraciclina (halos de inhibición de 23, 27 y 37 mm) y a la Estreptomicina (halos de inhibición de 19, 23 y 25 mm), lo indica que la mayoría de las bacterias fueron resistentes a estos antibióticos (Figura 2).  En cambio, ocho bacterias patógenas fueron sensibles al antibiótico Enrofloxacina (halos de inhibición de 35 a 42 mm) y nueve fueron sensibles a Sulfametoxazol-trimetoprima (halos de inhibición de 30 a 35 mm), lo que indica que este último antibiótico fue eficaz para matarlas a todas (a la concentración experimental establecida, Fig. 2). En diferentes países se ha reportado la resistencia de patógenos de pollos a los antimicrobianos (ARMPTFAR, 2021). Por ejemplo, en países de América Latina se han reportado patógenos de aves resistentes a distintos antibióticos (Casado et al., 2021; Briceño-Torres et al., 2007). La resistencia que presentan los patógenos a los antimicrobianos es variable, dependiendo de la región, el patógeno, entre otros factores; por lo cual debe valorarse caso por caso, para establecer un programa sanitario apropiado (Magnusson et al., 2021).

Figura 2. Sensibilidad de bacterias patógenas de pollo de engorda a diferentes antibióticos.

Conclusiones

Las bacterias patógenas aisladas de pollos de engorda tuvieron una alta sensibilidad a los antibióticos Sulfametoxazol-trimetoprima y a la Enrofloxacina, mientras que tuvieron una baja sensibilidad a la Oxitetraciclina y Estreptomicina.